Mediomics Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸说明书

Bridge-It ® S-Adenosyl Methionine (SAM)

Fluorescence Assay

Bridge-It ®S-腺苷蛋氨酸（SAM）

荧光分析

（96孔微孔板格式）

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Bridge It®S-腺苷蛋氨酸（SAM）荧光检测试剂盒仅用于实验室研究和开发（R&D）。本产品未获得政府监管部门批准用于诊断或治疗人类或动物疾病、监测食品或实验室研发以外的任何应用，不得用于此类目的。

S-腺苷甲硫氨酸（也称为SAM、SAMe或AdoMet）在所有类型生物的甲基化生物过程中起着关键作用。在甲基化循环中，SAM充当用于DNA和蛋白质共价修饰的甲基基团的供体。SAM水平的变异性与衰老过程、许多神经和精神疾病，包括阿尔茨海默病、抑郁症、HIV相关

神经功能障碍/痴呆、多发性硬化、帕金森病、脊髓变性、癫痫、纤维肌痛、偏头痛，以及慢性肝功能障碍、动脉硬化和癌症。目前，使用高压液相色谱法（HPLC）对SAM进行定量。高效液相色谱法耗时、成本高，而且由于需要大量有机溶剂，对环境不友好。

所有序列特异性DNA结合蛋白的共同特性是它们能够以高亲和力和特异性结合到含有核苷酸序列的DNA双链-即蛋白质的DNA结合位点。Mediomics的新型分析平台设计依赖于这一共同特征。包含给定靶DNA结合蛋白的序列特异性DNA结合位点的DNA双链体被分成两个DNA“半位点"双链体，每个双链体具有短的单链上臂。这些单链延伸足够短，使得在没有靶蛋白的情况下很少发生自发的重新结合。

然而，当靶蛋白存在时，其对全长DNA序列的高亲和力将驱动两个半位点DNA双链体的重新结合。通过将适当的荧光探针结合到两个DNA半位点的每一个中，可以敏感地检测这种重新结合。DNA结合蛋白的存在被检测为荧光信号的增加。如下图所示，该基本平台设计的简单变化允许DNA结合蛋白（黄色椭圆形）作为其特定配体的敏感生物传感器：

真核细胞含有约3000个序列特异性DNA结合蛋白。这些重要的蛋白质在有或没有特定的小分子协同调节因子（配体）的情况下起作用，控制基因组DNA活动的所有方面，包括基因表达、DNA复制、基因表达和基因表达，DNA修复医学组学正在应用其新的荧光分析平台开发体外分析，用于快速、灵敏地定量DNA结合蛋白及其小分子配体的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一种小分子配体，与MetJ甲硫氨酸阻遏蛋白结合并共同调节其活性。

Mediomics Bridge It®SAM荧光分析方法基于成熟的荧光测量技术和新的分析平台设计的结合，该平台利用DNA结合蛋白作为其各自小分子共调节剂（配体）的生物传感器。DNA序列特异性甲硫氨酸阻遏蛋白对其DNA结合位点的亲和力在其配体S-腺苷甲硫氨酸的存在下大大增加。对于该测定，MetJ共有序列被分成两个大致相等的DNA“半位点"，其中一半片段用荧光素标记，另一半片段用Oyster®645荧光团标记。测试样品中存在的SAM的相对量将影响测定中DNA-MetJ蛋白复合物形成的量。当这种复合物形成时，它使荧光标记的DNA半位点非常接近，并导致荧光信号发射的可测量变化（增加），可使用微板读取器（波长设置：

吸收nm；发射665nm）。然后使用SAM标准曲线确定测试样品中的SAM浓度。

Bridge It®SAM荧光分析方法显示出非常理想的性能特征，包括高（>6:1）信号与背景（S/B）比、良好的检测范围（~0.4μM–100μM）以及~0.4微米的检测灵敏度。该检测水平（~0.4μM）可用于定量大多数感兴趣的测试样品中的SAM，包括生物液体、细胞培养和发酵培养基以及组织和细胞提取物。这个化验

可以被修改为使用SAM作为反应物或产物的任何酶反应的测定。

测定试剂盒中包含的试剂量足以使用黑色96孔非结合表面微孔板进行所示数量的单个SAM测量。

将SAM测定溶液储存在-80°C下，直至使用，在该温度下，SAM测定液将保持其活性长达1年。如果-80°C的冷冻柜不可用，则将SAM测定溶液储存在-20°C，直到使用，在那里它将保持其活性长达6个月。Bridge It®SAM荧光分析试剂盒的剩余部分可在-20oC下储存在冰箱中，直至需要使用。仅解冻适当数量的

计划实验所需的试剂管。每管SAM测定溶液包含足以使用96孔黑色微孔板进行十（10）次SAM测量的试剂。

将SAM测定溶液在37℃下解冻30分钟，并在室温下保存直至使用。任何未使用的试剂可在4°C的冰箱中密封储存一周。SAM分析试剂盒试剂在-20°C下冷冻保存时，将保持其活性至少2个月。