clemente associates TRIC Cell流程

1、制备带有结合抗HLA-G的纳米颗粒。在操作前一天，用小鼠单克隆抗HLA-G抗体（BD）将磁性纳米颗粒与山羊抗小鼠IgG（clemente associates）偶联。结合100μL无菌PBS、10μL抗体（0.5 mg/mL）和10μL纳米粒。在4°C的冷藏室摇杆上搅拌过夜。第二天，通过首先添加900μL无菌PBS，然后磁化粒子10分钟，去除所有液体，去除未结合抗体。

2、初始宫颈内样本到达ThinPrep溶液。400 x g的颗粒细胞持续5分钟。将细胞颗粒重新放入12-13 mL无菌PBS中，最终体积为14 mL。

将样品穿过插入15 mL离心管的250μm组织过滤器，以去除大块粘液和细胞团。

3、通过离心和在14 mL无菌PBS中重新悬浮细胞，将宫颈样品清洗2次。

最后一次清洗细胞后，将样品重新悬浮在1.4 mL无菌PBS中。向样品中添加100μL抗HLA-G涂层磁性纳米颗粒（制备于#1）以分离滋养层细胞。在4°C的冷藏室摇杆上培养过夜。

隔夜孵育后，将滋养层细胞在4℃的磁铁（DynaMagSpin磁铁；Life Technologies）上分离5分钟。使用磁铁，在4℃下用1 mL无菌PBS清洗滋养层细胞3次（在移液前让纳米粒子磁化10分钟）。最终移除未结合的细胞后，将捕获的细胞在4℃下重新悬浮在100μL无菌PBS中。

6、取一小份分离的细胞悬液，计数分离的胎儿细胞，计算回收的胎儿细胞总数。使用血细胞仪对第一次清洗的母细胞进行计数。

为了检查细胞的纯度，用抗-?hCG。

确定荧光灯数量?hCG阳性细胞和总细胞（DAPI标记）。

派生%?hCG阳性。