dld-diagnostika EA611/96说明书

Calretinin ELISA

酶免疫法定量测定血浆和血清中钙视网膜蛋白

1.试验的介绍和原理

一段时间以来，世界上超过55个国家禁止生产和使用石棉。然而，石棉相关癌症——主要是恶性肺癌和间皮瘤——的数量仍然很高。

由于这种疾病的潜伏期很长，而且一些国家正在生产和应用石棉，预计不会有实质性的改善。早期发现肿瘤——最好是在没有临床症状的阶段——可能会提高治愈治疗的机会。DLD Diagnostika GmbH与德国社会意外保险预防和职业医学研究所（波鸿鲁尔大学（IPA）的科学家合作，开发了一种有前途的方法，该方法基于钙视网膜蛋白作为血浆和血清样本中早期检测（尤其是间皮瘤）的生物标记物。目前，钙视网膜蛋白是检测间皮瘤的最佳标记物之一。

calretinin ELISA是一种利用纯化兔多克隆抗体的夹心酶免疫分析法。在培养过程中，稀释患者样本中的钙视网膜蛋白与固定在微量滴定板孔表面的钙视网膜蛋白抗体（捕获抗体）结合。清洗步骤后，添加生物素化钙视网膜蛋白抗体（检测抗体），该抗体与患者样本中捕获的钙视网膜蛋白结合。在第二个洗涤步骤后，加入共轭链霉亲和素过氧化物酶，与生物素化检测抗体特异性结合。第三步洗涤后，酶的结合量——相当于钙视网膜蛋白的量——通过底物四甲基本甲啶（TMB）的周转进行量化。

在酶反应过程中，会产生蓝色染料。加入硫酸会停止反应，使溶液变黄。使用微量滴定板读取器在450 nm（参考波长在570 nm和650 nm之间）下测量样品的消光度，并使用分析的标准品和对照品计算钙视网膜蛋白的浓度。

2.注意事项

? 仅供体外使用。

? 应使用一次性手套和安全眼镜。

? 本试剂盒中使用的所有人类来源试剂均经过HIV I/II抗体、HCV和HBsAg检测，结果为阴性。然而，由于没有任何测试方法可以*保证不存在传染源，因此这些试剂应作为潜在的生物危险物质处理。

? 用于制备试剂盒的动物源性材料来自经认证的健康动物，但这些材料应被视为具有潜在传染性。

? 该试剂盒的某些组件含有危险试剂。这些部件标有适当的危险标签。

3.储存和稳定性

到达后，将试剂盒储存在2-8°C的温度下。一旦打开试剂盒，试剂盒将保持稳定，直至到期。有关制备试剂的稳定性，请参阅试剂的制备。不要使用超过套件标签上显示的有效期的组件。不要在单个分析中混合不同批次的任何试剂盒成分。

需要但未提供的其他材料和设备：

? 移液管15、50、60和100µl

? 轨道振动筛

? 多通道移液管或微孔板清洗装置

? Eppendorf Multipette（或类似设备）

? 微孔板光度计（450 nm）

? 离心机（2500克）

? 蒸馏水

5.样本收集和储存

可使用EDTA血浆和血清进行检测。

EDTA血浆和血清

应使用EDTA血浆和血清。溶血和血脂样本

不应使用。

样品可在2-8°C下储存12小时。对于更长的储存时间（最多24个月），样品必须在-20°C下冷冻。应避免重复冷冻和解冻样品。