spherotech SPHERO简介

羟基颗粒用于促进免疫分析的发展，以及蛋白质、细胞或各种目标分析物的定量、分离、纯化和表征。为了提供羟基的好处，Spherotech提供SPHEROTM羟yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉。这些共聚物颗粒提供亲水表面，减少固定化蛋白质的变性。此外，羟yi基基团与水溶液中的一层水形成氢键，防止颗粒聚集。这两个特征转化为更长的配体稳定性，更低的非特异性

结合电位，与表面疏水性更强的颗粒相比，具有更稳定的颗粒溶液。尽管羟基不会自发地与生物分子上的官能团发生反应，但它们可以通过许多已知的反应机制被激活进行共价偶联。该反应导致配体的共价连接，并且可以在水或非水条件下进行。通过利用非水条件，可防止活化剂和中间基团的水解。为了促进与羟yi基表面的共轭，可以使用交联剂在粒子和共价偶联的配体之间形成间隔臂。各种交联剂已成为*的工具

用于制备用于许多免疫分析、蛋白质分离和鉴定协议的包衣珠。常见和有效的交联剂是异双功能交联剂，它具有两个反应性基团。杂双功能交联剂在分子共轭过程中提供更好的控制和定向，以减少二聚体和聚合物的生成。仔细选择配体、固定化化学和配体密度将有助于产生适合特定应用所需生物活性的选择性和灵敏度。

PMPI或对马来酰亚胺苯基异氰酸酯是一端带有异氰酸酯基团，另一端带有马来酰亚胺基团的异双功能交联剂。因此，它用于促进硫化配体与配体的共轭

羟yi基珠表面。传统上，PMPI用于将硫化蛋白质或肽与碳水化合物、类固醇或维生素1交联。PMPI对水分非常敏感，需要在非水系统中溶解。信息技术

不能与缓冲液一起使用，但可溶于甲苯和己烷，也可与二氯甲烷反应。

在此，我们提出了一种方法，适用于使用PMPI将巯基化配体交联到球形羟yi基（HEMA）/聚苯乙烯共聚物磁粉上。

其他方便的活化方法使用化合物在羟基颗粒上形成活性羰基

如羧基二咪唑（CDI）或碳酸二丁二酰亚胺（DSC）。这些活化剂生成咪唑氨基甲酸酯（CDI）或NHS碳酸盐（使用DSC），然后它们会自发地与胺反应。在里面

在CDI的情况下，咪唑氨基甲酸酯也会自发地与巯基发生反应。由于这些活化试剂的任何部分都不会成为共轭分子和羟基珠之间最终键的一部分，

它们被认为是零长度交联剂（2,3）。本文描述了使用CDI和DSC的详细耦合协议。然而，Spherotech建议优化质量试剂和偶联条件，因为两者都会影响配体与功能化珠表面偶联的质量

材料：

1.HEMA-300-10（HEMA/聚苯乙烯共聚物磁粉，1%w/v，25-37μm，10 mL）

2.对马来酰亚胺苯基异氰酸酯（PMPI）

3.磷酸盐缓冲盐水，0.1M，pH值7.4（PBS）

4.二甲基亚砜（DMSO）

5.乙腈

6.具有巯基（–SH）反应性化学基团的化合物