荧光底物

基于 ANSN 的荧光底物
的一般结构图解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 荧光底物的一般结构。在本化合物家族中，R 1 是三肽，其COOH-末端残基通常是精氨酸。R2和R3可以是氢、烷基、芳基或环烷基。虚线表示各种丝氨酸蛋白酶水解的位点。

含有荧光报告基团 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是用于监测各种丝氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此类化合物中，ANSN 报告基团与短的三肽序列相连（在 R1 位置）。肽序列旨在优化酶和底物之间的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亚位点位置的变化，并且通?；嵊跋斓孜锏亩ρР问?。作为有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基团之间水解。一旦从肽部分切下，ANSN 基团的相对荧光就会增加约 1000 倍。

下页确定的动力学特性将有助于选择合适的底物。已证明 ANSN 底物对因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特别有用。尽管单独的因子 VIIa 的底物水解速率相对较慢，但当组织因子加入分析系统时，几种化合物（例如化合物 SN-17a）的 kcat 会发生很大变化。

使用信息：
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10mM 储备溶液形式提供，通?？捎糜诜治?400 nM 至低至 50pM 浓度范围内的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最终浓度使用，并且可以在大多数生理缓冲液（即 TBS、HBS、PBS 等）中稀释到该最终浓度。反应（荧光的相对变化）可以使用标准荧光计或荧光读板器进行监测。动力学或终点模式可与设置在以下波长（激发=352nm，发射=470nm）的仪器一起使用。通过在发射光束中使用 390 至 450 nm 长通截止滤波器，可以最大限度地减少光伪影。

下表列出了每种底物的动力学特性，表下方列出了期刊参考文献列表作为使用示例。

DMSO 中的储备底物溶液应在 4°C 或更低的温度下冷冻储存，并应避光。在这些条件下，化合物将保持稳定超过一年。

上海起发haemtech荧光底物说明书