描述

HFc-NC-MMAF是抗人IgG Fc特异性抗体，通过不可裂解的连接子与一甲基auristatin F(MMAF)结合?？固宀糠质侨薎gG Fc区的特异性多克隆抗体。单甲基澳瑞他汀F(MMAF)是一种细胞毒性小分子，通过阻断微管蛋白的聚合来抑制细胞分裂。连接MMAF与抗体的不可裂解连接子在细胞外液中是稳定的，但进入细胞后可以通过非特定机制裂解。

申请方案

我们建议您对细胞进行滴定，以确定基于细胞的活力检测的数量。同样重要的是确定2°ADC本身的浓度，而不会对每个细胞系造成显著的细胞毒性（即小于10%的细胞死亡）。您可以选择细胞毒性检测的试验方法。以下是使用CellTiter-Glo发光法作为检测方法进行细胞活力测定的两个示例。

• 在细胞活力试验中使用恒定量的HFc-NC-MMAF：
  1. 在培养基中将细胞新鲜分裂成不透明的多孔板。在96孔板中每孔加入100μl细胞。典型范围是96孔板中每孔约5000至20000个细胞。然而，应确定每个细胞系的细胞数量。
  2. 在培养基中稀释含单克隆一抗(mAb)的人Fc。然后在培养基中对一级mAb进行系列稀释。
  3. 在每个孔中加入2 l稀释的一级mAb。一级mAb的终浓度应介于100 nM-0.01 nM（或15 ng/μl-1.5 pg/μl）之间。在抗体存在下孵育细胞5-10 min。
  4. 同时，在培养基中制备2°ADC HFc-NC-MMAF稀释液。应确定每种细胞系中每种特定mAb的HFc-NC-MMAF稀释度。然而，检测孔中HFc-NC-MMAF的推荐初始浓度为6.6 nM（或1 ng/l）。例如，在这种情况下，将2.9 l11.3 M（或1.7 g/l）HFc-NC-MMAF稀释于97.1 l培养基中，然后在用一级mAb预孵育的96孔板中每孔加入2 l稀释的HFc-NC-MMAF。
  5. 此外，每个测定板中还应包括未用一级mAb或2°ADC处理的对照孔，以获得正常细胞生长值。
  6. 根据培养方案孵育多壁平板72小时。
  7. 向96孔板的每个孔中加入100 lCellTiter-Glo试剂。
  8. 在定轨振荡器上混合内容物2 min，以诱导细胞裂解。在室温下孵育10 min。
  9. 读取发光强度。