biochain epoc培养说明

一、MEPOC生长培养基的制备

我们推荐使用Biochain的MEPOC生长培养基（CAT Z7030033）培养我们的MEPC。

一。在室温水浴中解冻MEPOC生长介质补充剂（CAT Z7030034）。

2.在Mepoc基本培养基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整个体积（25 ml）的EPOC生长培养基补充剂，制备Mepoc生长培养基。生物链的mepoc生长培养基不含抗生素，但如果担心污染，可以在培养基中添加抗生素。

三。使用前，在37°C水浴中加热部分mepoc生长介质。

二。解冻冷冻细胞

一。在37°C水浴中加热EPOC生长培养基。

2.用70%乙醇擦拭冰冻小瓶的外部。在37°C的水浴中快速解冻冷冻细胞。

三。将细胞悬液无菌转移到15ml试管中。用1毫升生长培养基冲洗小瓶，并在15毫升试管中与细胞混合。以170克（或1400转/分）的速度离心5分钟，使细胞沉淀。除去上清液。加入5ml新鲜小鼠epc培养基，置于t25烧瓶中。

四。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。健康的培养物显示纺锤体形态，培养2-3天后细胞数量应加倍。

三、亚培养细胞

一。当细胞达到100%汇合时进行继代培养。

2.在通过细胞前一天更换培养基。

三。在37°C水浴中加热Dulbecco的PBS、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生长培养基。

四。用Dulbecco的PBS冲洗细胞。

5个。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培养细胞3-5分钟，直到大约90%的细胞开始分离。轻轻地填充血管使细胞分离。

6.加入相当于胰蛋白酶/EDTA体积1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶，轻轻摇动培养管混合。

7号。轻轻地重新悬浮细胞，并将细胞转移到15ml锥形管中。

8个。在室温下将细胞悬液在170 x g下离心5分钟。

9号。小心地去除上清液，不要干扰细胞颗粒。在生长培养基中重新悬浮细胞。

10个。将它们按1:5的比例放入新的培养皿中。

11号。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。每隔一天换一次。

iv.在充满mepoc生长培养基的t25、t75、t125和t225烧瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc。

当烧瓶到达时：

一。从烧瓶中倒出大部分培养基，并在烧瓶中留适量。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空气在加湿培养箱中培养细胞。第二天换成中号，以后每隔一天换一次。健康的培养基在培养2-3天后，纺锤形细胞形态和细胞数量应加倍。