Quickzyme QZBtotcol1操作方法

介绍

胶原是细胞外基质的主要成分之一。胶原生成的失调会导致纤维化（过多的胶原）或骨关节炎（过少的胶原）等病理变化。

因此，在许多情况下，胶原蛋白的测定是很重要的

疾病相关研究。

quickzyme总胶原测定是基于羟脯氨酸的检测。羟脯氨酸是一种非蛋白性氨基酸，存在于哺乳动物的弹性蛋白和胶原蛋白中。它的存在主要局限于胶原的三螺旋，在那里它的存在增加了三螺旋的稳定性。羟脯氨酸是在脯氨酸羟化酶的作用下由特定的脯氨酸残基翻译后形成的。组织水解物中的羟脯氨酸可以直接测量胶原蛋白的含量。

胶原的测定是从组织样品在95oC的6M HCl中*水解开始的。水解产物中的羟脯氨酸残基通过对prockop和udenfriend（anal）所述方法的改进进行定量。Biochem.，1960，1:228-239）。该分析测量了样品中羟脯氨酸的总量，它代表了样品中存在的所有类型的胶原，而不区分胶原类型和前胶原、成熟胶原和胶原降解。

产品

该测定是简单的，并且结果在570 nm处具有大的吸光度。这种分析方法的发展使得它不需要酸水解后的干燥步骤，而酸水解通常需要特殊的设备。

胶原蛋白标准线样品制备的移液方案

分析程序

建议对所有样品和标准品进行分析，一式两份

一。按照“样品制备”中的说明制备样品。

2.按照“标准制备”中的说明制备胶原蛋白标准品。

三。用移液管将35微升标准溶液移到分析微孔板的适当孔中。

四。用移液管将35μl稀释的水解未知样品（在4M HCl中）移到适当的孔中。

5个。每孔加入75μl试液，混匀。

6.用一个封闭的胶粘板封条盖住板，在室温下孵育20分钟，同时摇动板。

7。通过检测试剂A和B2:3（RESP 30μL＋45 L L/阱）混合，制备一套足以检测待测威尔斯（75μL/阱）的试剂。

8。小心地拆下板密封件

9。每口井加入75μl检测试剂。

10。用封闭的粘合板密封件盖住板。

11。摇动盘子使之充分混合。在60°C的烘箱中培养60分钟（不要使用更高或更低的温度）。

12。把盘子放在冰上冷却5分钟至室温

13。混合板并小心地拆下板密封件

14。清洁板底部，在570 nm（可接受540-580 nm）下读取板并进行数据分析。

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