- 内切
糖苷酶从清洁制剂中的糖蛋白 - 高度稳定的酶切割完整的聚糖 - 不含甘油，NaCl或其他添加剂，如EDTA。
- 测试所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性
内切糖苷酶是用于分析糖蛋白的广泛使用的酶。这些酶从糖蛋白释放完整的聚糖，而外切糖苷酶释放单个单糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙?；咸前罚事短堑龋?。
PNGase F通常包含在酶组中，因为其切割完整的N-连接聚糖的活性相似，尽管它实际上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-连接聚糖的壳二糖核心的个β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之间切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之间切割N-连接的聚糖，留下带电荷的残基，其有助于增加去糖基化蛋白质的溶解度，降低蛋白质聚集体沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-连接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定类型的N-连接聚糖。
酶的这种分类还包括O-糖苷酶，其从丝氨酸或苏氨酸氨基酸中除去核心1O-连接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。O-连接的聚糖通常含有在分支和线性连接中与半乳糖连接的另外的单糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶来除去额外的糖。
qa-bio E-RPNG01说明书
来自Elizabethkingia miricola的重组PNGase F.
部件号 - 酶
E-RPNG01的量 - 60μLs¹E
-RPNG01-20 - 20μls¹E
-RPNG01-200 - 200μls²¹
包括缓冲液，变性剂和Triton-
X²仅包括酶
PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶
从含有Elizabethkingia miricola基因的克隆的大肠杆菌菌株中分离重组PNGase F. 来自天然酶（E-PNG01）的重组酶的活性或比活性没有可检测到的差异。
PNGase F从糖蛋白切割天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性使裂解率提高到100倍。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。PNGase F将在孵育条件下保持活性至少72小时。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有α-（1,3） - 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.
PNGase F源自Elizabethkingia miricola的大肠杆菌重组PNGase F基因
EC 3.5.1.52
内容
的重组PNG酶F（0.3 U）在20mM的Tris-HCl，pH 7.5中60微升等分试样
包括用20μL和60μL包尺寸
5倍PNG酶?F反应缓冲液7.5 PNG酶的F - 250 mM磷酸钠，pH 7.5中
PNG酶?F变性溶液 - 2％SDS，
1Mβ- 巯基乙醇PNGase F Triton X-100-15％溶液
比活力 > 25 U / mg
活性 5U / ml
分子量 36,000道尔顿
PNGase F 6-10的pH范围，宜7.5
PNGase F建议用法
1.在Eppendorf管中加入多200μg的糖蛋白。用去离子水调节至35μl终体积。
2.加入10μl5xPNGase F反应缓冲液7.5和2.5μlPNGaseF变性溶液。在100?C加热5分钟。
很酷。加入2.5μlPNGaseF Triton X-100并混合。
4.向反应中加入2.0μlPNGaseF. 在37?C孵育3小时。
特异性 PNGase F从糖蛋白切割天冬酰胺连接的（N-连接的）寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性使裂解率提高到100倍。大多数天然蛋白质仍然可以*N-去糖基化，但必须增加孵育时间。PNGase F将在孵育条件下保持活性至少72小时。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白上发现的含有α-（1,3） - 连接的核心岩藻糖的寡糖; 为此目的，使用肽N-糖苷酶A.
比活度定义为在37℃，pH7.5下，在1分钟内催化从1微摩尔RNase B释放N-连接寡糖所需的酶量。通过SDS-PAGE监测切割（切割的RNase B迁移更快）。
储存酶储存在4?C。
