IUB:3.1.21.1
牛胰腺脱氧核糖核酸酶是一种核酸内切酶,它分裂磷酸二酯键,优先与嘧啶核苷酸相邻,产生在 3' 位置具有游离羟基和在 5' 位置具有磷酸基团的多核苷酸。限制消化的平均链长是四核苷酸。
用途:Worthington 为不同的应用提供不同纯度水平的 DNase。产品代码:DPRF 和 DPRFS 均专为分子生物学应用而设计,并且含有低水平的 RNase 和蛋白酶活性。它们都适用于需要消化 DNA 以回收完整 RNA 或必须保持结构蛋白或酶完整性的技术。应用包括切口平移、DNA 作图、核 RNA 和蛋白质的分离、质粒构建以及 RNA 探针和 RT-PCR 的 RNA 聚合酶合成。DNase 还用于组织培养工作以消化受损细胞中的 DNA,从而降低粘度并去除膜结合的 DNA 片段。沃辛顿代码:DP 和 DCLS 适用于这些应用。
稳定性/存储:如果储存得当,所有等级的 Worthington 脱氧核糖核酸酶都可以稳定保存 2-3 年。所有等级的 Worthington DNA 酶的推荐储存温度为 2-8°C。产品代码 DPRFS 可在 -20°C 下储存。为了长期保存在溶液中,产品代码 D 和 DPFF 可以溶解在 5mM 醋酸盐、1mM 钙、pH 4.5 中,并以一次性等分试样在 -20°C 或 -70°C 下保存长达一年。只冻融一次;解冻的等分试样可稳定冷藏至少数周。添加 50% 甘油将在 -20°C 下保持液态而不影响稳定性,并且可以将 50% 甘油中的材料去除并重复返回到 -20°C。由于不存在蛋白酶,DPRF异常稳定。对于重组后的 DPRF 的长期储存,使用水或任何 pH 值 4.0 至 9.0 的缓冲液(磷酸盐除外);避免钙螯合剂;添加 50% 甘油,在 -20°C 下以液体形式储存;分装在一次性容器中;只冻融一次;解冻的等分试样可稳定冷藏至少数周。
单位定义:当作用于 pH 5.0 的高度聚合的 DNA 时,1 个单位在 25°C 下导致 260nm 吸光度每分钟每毫升增加 0.001。 注意:其他供应商报告的 Kunitz 单位可能比在 Worthington 测量的 Kunitz 单位高 2 到 4 倍。在 Worthington 测得,一个 Kunitz 装置在 37°C 的 50mM Tris、1mM Mg 2+、1mM Ca 2+、pH 7.8 的 50µl 反应体系中在 10 分钟内消化 1µg 的 λ DNA。对于其他 DNA 和缓冲系统,消化单位与 Kunitz 单位的相关性是不同的。
技术说明: 产品代码 DPRF:每瓶每 10,000 单位 DNase I 含有大约 2mg 甘氨酸和 2µmoles 钙。将整个小瓶溶解在 5ml 中相当于 1mg/ml 溶液。
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